PBMCからのリンパ球分画のための単球除去
CELLNETTA用途事例
現在、ヒトの血液や組織を薬の原料とする再生医療等製品の研究が盛んに行われています。薬の原料となる特定の細胞には、他の細胞が混入しないことが望ましく、もとの血液や組織から高精度に欲しい細胞のみを取り出す方法が求められています。
細胞を分ける手段として磁気ビーズ分離がありますが、細胞と抗体の反応や分離後の抗体の洗浄などの工程により、分離に時間がかかってしまいます。そこで、作業時間を短縮できるCELLNETTAをご提案します。
サイズ差のある細胞であれば、CELLNETTAに細胞懸濁液を注ぐだけで、簡単に細胞をサイズ分けできます。
今回は、レグセル株式会社研究開発部三上統久先生（※2021年10月時点）が行った、ヒトPBMCからのリンパ球分画のための単球除去にCELLNETTAを用いた事例をご紹介します。（動画でも紹介しています）
実施方法
- ①ヒトPBMCをBuffer※1で5×106 cells/mLとなるように細胞数を調整する。
- ②CELLNETTAを親水化処理する。※2
- ③①で調整した細胞懸濁液を1 mL、CELLNETTAに通す。
- ④通液を確認後、5 mLのBufferを通す。
- ⑤CELLNETTAを通過した細胞懸濁液を、さらに磁気ビーズ精製し、フローサイトメトリー法で解析する※3。
※1 Bufferの調製方法（500 mL調製の場合）
| D-PBS | 489 mL |
|---|---|
| FBS | 10 mL（終濃度2%） |
| 0.5 mol/LEDTA溶液 | 1 mL（終濃度1 mM） |
※2 詳細は、CELLNETTAのユーザーガイド「親水化マニュアル」をご覧ください。
※3 磁気ビーズ精製およびフローサイトメトリー法の手順は各メーカーの操作手順書等をご参照ください。
結果
ヒトPBMCにはリンパ球と単球が多く含まれています。リンパ球は単球と比較して細胞サイズが小さいため、CELLNETTAによるサイズ分けを試みました。
メッシュサイズ7 µmのCELLNETTAでヒトPBMCを処理したところ、通液画分において単球の減少が確認できました（図1）。
次に、再生医療等製品の原料として用いるT細胞の調製に適応するために、CELLNETTAまたは抗CD14抗体標識磁気ビーズによる単球除去を実施後に、CD4陽性T細胞を磁気ビーズで精製しました。
その結果、CELLNETTA処理、CD14ネガティブセレクション処理ともに未処理のヒトPBMCで確認されるCD4精製後の単球混入を抑えることができました（図2）。
今回の結果から、CELNETTAを用いることでヒトPBMCから単球の除去およびリンパ球の分画ができることが分かりました。
ヒトPBMCをCELLNETTAに注ぐだけの簡便かつ短時間で完結する操作であるため、従来法と比べて作業時間を短縮でき、再生医療等製品を製造する上でのコストダウンにつながることが期待されます。
抗CD4抗体を用いたポジティブセレクション
ネガティブセレクション
使用したCELLNETTA
| メッシュサイズ | ガンマ線照射 | 梱包数量 | 品番 |
|---|---|---|---|
| 7 µm（特注品） | 有 | 1 | MZM1B007B50G |
注意事項
- ・本品は開発品です。
- ・本品は医療機器ではありません。
- ・本品を実装した完成品を、直接市場に出さないでください。
CELLNETTAの詳細情報
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※本製品は再利用できません。
- 50 ml遠沈管に適合
- 個包装
- 国内製造
- ガンマ線照射済み
| 50 ml遠沈管適合サイズ | |||
|---|---|---|---|
| メッシュサイズ（µm） | 梱包数量 | 品番 | 事例 |
| 5 | 1 | MZM1B005B50GA | 細胞懸濁液からの培養液の精製 全血・PBMCからの赤血球除去 |
| 5 | MZM1B005B50GB | ||
| 10 | 1 | MZM1B010B50GA | シングル細胞の精製 |
| 5 | MZM1B010B50GB | ||
| 15 | 1 | MZM1B015B50GA | クラスターおよびシングル細胞の分画 |
| 5 | MZM1B015B50GB | ||
| 20 | 1 | MZM1B020B50GA | クラスターおよびシングル細胞の分画 |
| 5 | MZM1B020B50GB | ||
| 100 | 1 | MZM1B100B75GA | 薬効試験におけるスフェロイドサイズの均一化 |
| 5 | MZM1B100B75GB | ||
| 200 | 1 | MZM1B200B75GA | マイクロキャリアビーズの分画 スフェロイドサイズの均一化 |
| 5 | MZM1B200B75GB | ||
※目的の細胞よりやや小さいメッシュサイズの使用を推奨しております。
用途やメッシュサイズの選定については、お気軽にお問い合わせください。
※細胞形状・流速条件等により、通過挙動は変化します。